200813 DNA concentration 구하기

<전체 실험 개요>

 

A. FBXO38 gene이 있는 plasmid를 가진 E.coli를 고체LB배지에 배양해서 single colony를 얻는다.

B. Single colony를 따서 액체LB배지에 접종하고 배양한다.

C. 배양액에서 plasmid만 추출해 얻는다.(midi prep)

D. Plasmid의 FBXO38 gene을 다른 vector에 옮긴다.(subcloning)

E. FBXO38 gene을 옮겨준 새 vector를 cell에 transfection 시킨다.

 

 

 

 

8월 13일 오늘은 아침에 대학원 면접을 봤다. 자대라 그런지 뭐... 면접 시작할때 라면에 물올리고 왔어도 라면 다 안익었을듯... 면접관하신 교수님 두 분께 감삼다~ 10번정도 복창하고 나왔다.

 

오늘은 어제 끝낸 midi의 결과물인 plasmid DNA의 농도를 측정하는 법을 배웠다.

DNA가 흡수하는 특정 파장을 이용해 흡광도를 재서 DNA의 농도를 재는 방법이다.

흡광도를 이용하는 경우 0을 잡아줄 blank가 있어야 하는데, DNA의 경우 희석할 때 D.W.를 베이스로하기 때문에 blank도 D.W.로 해주면 된다.

Protein의 경우 브레드포드를 베이스로하기 때문에 blank도 브레드포드로 한다고 했다.

 

 

<Photometer로 농도 구하기>

1. Ep tube에 sample DNA의 dilution을 해준다(농도가 너무 높으면 농도 측정이 안된다)

   DNA 1ul + D.W. 99ul = 100ul

2. 손으로 ep tube를 tapping해준 뒤(손가락으로 톡톡톡 쳐주면됨) spin down 시켜준다.

   Centrifuge를 켰다가 3~5초 뒤 꺼주면 된다.

3. Biophotometer 기기로 농도를 측정한다.

   i) Photometer기기와 프린트기기 전원을 모두 켠다. Photometer기기의 dsDNA버튼을 누른다.

   ii) Cuvette을 꺼내 blank나 dilution한 sample을 넣어주고 cuvette을 기기에 꽂는다. Cuvette의 투명한 부분이 화살표 방향에 오도록 해주고, 지문이 묻지 않도록 손으로 투명한 부분은 만지지 않는다. 용액을 옮길땐 피펫 용량을 100ul보다 좀 더 많이 잡고 한다.(대략 120ul쯤)

   iii) Blank잴 땐 기기의 blank 버튼을 누르고 첫 sample재기 전에 dilution버튼을 눌러서 dilution 정보를 입력한다. 그러고나서 sample잴 땐 sample버튼 누르면 됨

   iv) 농도에 대한 정보가 프린터기에 쭉 나온다.

4. 농도를 모두 측정하면 새 ep tube에 naming(vector 이름, gene, 농도)을 하고 옮겨준다.