200810 Subcloning 개요/streaking

<전체 실험 개요>

 

A. FBXO38 gene이 있는 plasmid를 가진 E.coli를 고체LB배지에 배양해서 single colony를 얻는다.

B. Single colony를 따서 액체LB배지에 접종하고 배양한다.

C. 배양액에서 plasmid만 추출해 얻는다.(midi prep)

D. Plasmid의 FBXO38 gene을 다른 vector에 옮긴다.(subcloning)

E. FBXO38 gene을 옮겨준 새 vector를 cell에 transfection 시킨다.

 

20년 8월 10일 처음으로 이 랩실에 오게 된 날이다. 전체 개요 중 A를 다 끝내지도 못한다.

 

 

 

A. FBXO38 gene이 있는 plasmid를 가진 E.coli를 고체LB배지에 배양해서 single colony를 얻는다.

 

<Streaking>

1. 냉동실에 FBXO38 gene이 있는 plasmid를 가진 E.coli가 우글우글 있는 tube가 있다. 그걸 꺼내온다. E.coli 때문인지 색이 노랗다.

2. 피펫에 팁을 꽂고 팁 끝을 알콜램프 불에 살짝 그을린 후 식힌다. 그리고 그 팁을 E.coli를 찍어서 고체 LB plate에 streaking한다.

-유의사항: contamination 방지를 위해 고체 LB plate 주변에 알콜램프를 계속 켜둔다. 앞으로 LB plate 뚜껑을 열 때는 가급적 알콜램프를 켜서 그 주변에서 뚜껑을 열도록 한다. 팁을 불에 그을리는 것도 contamination 방지를 위함인 것으로 알고있다.(정확히는 팁에 있을 균을 죽이는 과정)

3. Streaking을 마치면 뚜껑 다시 덮고 incubation에 넣어준다. 약 37도에서 14~15시간 돌리는데 상황봐서 조금 더 자라야겠다 하면 incubation시킬 수 있다. 어쨌든 시간이 오래걸리니 보통 퇴근 전에 overnight으로 넣어두고 집에 가면 된다. (다음날 출근하고나서 빼갖고 오는거 까먹지 말기)

 

streaking 하는 방법. 그을수록 희석이 돼서 single colony를 얻을 수 있다.