200902 접종

 

어제 incubation끝난 plate를 4도(냉장고)에 보관했다가 접종할 때 꺼내와준다. 총 6개의 15ml tube에 접종해줄 것이다. 이런 접종의 경우 최대 12개의 tube에 접종해서 실험을 진행할 수 있다. 지금의 경우 USP6 하나만 보는거지만 샘플이 서너개되면 각 샘플당 tube 3~4개 접종하면 된다. Contamination 최소화를 위해 알코올 램프를 켜고 시작한다.

 

 

<접종>

 

1. Premix 만들기: tube당 액체LB(-/-) 2ml + Amp(1000x) 2ul >> 액체LB 13ml + Amp 13ul

   LB plate에는 Amp가 있지만 액체LB에는 없으므로 Amp를 넣어줘야 한다. Zipel 냉동실에 있으니 꺼내서 녹여주고 그동안 tube에 naming을 해준다. 액체LB는 저번에 미리 소분해뒀던 것을 꺼내서 쓴다.

   Premix는 다른 새 tube에 만들어주면 된다. 액체LB가 총 12ml필요할텐데 premix만들땐 여유있게 만드는 것이 좋으므로 액체LB 13ml와 Amp 13ul을 tube에 넣고 voltexing해준다. Voltexing할 땐 액체에 회오리가 만들어져야하는데 끝까지 잘 안생기면 뒤집어서도 voltexing해준다.

2. Premix 2ml씩 6개의 tube에 넣어준다.

   에이드로 12ml를 딴 후 tube마다 2ml씩 넣어준다.

3. 10p tip을 램프 불로 녹인 후 식힌 뒤 plate의 colony를 따주고 premix넣어준 tube에 colony를 딴 팁을 넣어준다. Colony는 여러 군데에서 골고루 따준다.

4. Shaking incubator에서 14h incubation